PVDF膜
剛開始做WB的人也許會有這種疑問：為什么實驗室的老師（或者師兄師姐們）在教我們做WB的時候，如果是用PVDF膜做，總是小心翼翼的剪，節(jié)省著用，甚至一些邊邊角角也舍不得丟掉呢？其實，這不僅是因為PVDF膜比較貴，還由于PVDF膜是做WB的“*”。
聚偏二氟乙烯（PVDF）膜作為基質(zhì)的轉(zhuǎn)印膜由Millipore公司在1985年首先推出。與硝酸纖維素膜相比，PVDF膜在蛋白質(zhì)截留能力，機械強度和化學(xué)相容性上都更*的性能（Pluskal,et al.,1986）。市售硝酸纖維素膜的典型結(jié)合量是80-100μg/cm2,而PVDF膜結(jié)合量是100-200μg/cm2（而結(jié)合強度PVDF比硝纖膜強6倍！）。在艾滋病毒（HIV）血清學(xué)檢驗中直接比較PVDF和硝酸纖維素膜，PVDF膜具有更好的截留總HIV抗原能力并提高抗體檢測糖基化被膜抗原的性能。但是PVDF膜zui大的優(yōu)點不僅于此：更好的機械強度和化學(xué)耐受性使PVDF膜在各種染色應(yīng)用和多重免疫檢測中成為理想選擇；而且單個凝膠的泳道復(fù)本可用于多種目的，如考馬斯亮藍(lán)染色后切出條帶并進(jìn)行N-末端測序、蛋白消化/肽分離/內(nèi)部測序和免疫檢測（Kurien,et al.,2003）。特別是需要做N端蛋白測序，在相當(dāng)“嚴(yán)酷”的清洗條件下，當(dāng)尼龍或者硝纖膜已經(jīng)降解的情況下PVDF膜依然保持本色，笑傲江湖。所以PVDF也是要做蛋白測序的*選擇。此外，個人經(jīng)驗，一些強疏水蛋白用PVDF膜效果會更好一些。PVDF膜適用的檢測方法也不少，化學(xué)發(fā)光、常規(guī)顯色、同位素和標(biāo)準(zhǔn)染色都一樣OK，但不適合熒光。PVDF膜特別注意的是需要100%甲醇預(yù)處理（不超過15秒）再用緩沖液平衡，才能用，而且適用過程中萬一干了也要同樣程序再處理（不過要真出現(xiàn)這種問題也是自己欠扁，誰要你不小心呢，轉(zhuǎn)膜前處理也就罷了，轉(zhuǎn)膜后再這樣處理可能會影響后繼的抗體識別呢）。PVDF膜同樣分0.45um和0.2um的，后者孔徑小，對小分子蛋白有較好的攔截吸附，背景可能會比前者稍高。
PVDF膜常見的有以下幾個品牌
公司 | 產(chǎn)品名 | 孔徑 | 適用范圍 | 參考價格 |
Millipore | Immobilon Transfer Membranes | 0.45um 0.2um |
| 2050.00 |
Bio-Rad | Immun-Blot PVDF Membrane |
| Chemiluminescent, colorimetric western blots, amino-terminal sequence and total amino acid composition |
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Pierce | PVDF Membrane | 0.45um 0.2um | Western, Southern, Northern, and dot blots |
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Pall Life Science | BioTrace PVDF Transfer Membrane | 0.45um | Nucleic acid and protein transfers. Protein sequencing | 2200.00 |
Invitrogen | PVDF Membrane | 0.45um | Protein sequencing, immunoblotting |
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Whatman | Westran Clear Signal PVDF Membrane | 0.45um | Western blots |
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作為PVDF膜的*，Millipore公司的PVDF膜Immobilon系列分為Immobilon-P（0.45um）, -PSQ（0.2um）, -FL（用于熒光顯色）和Blotting Sandwiches for High Troughput四種。Immobilon-P膜孔徑均一，具有*的吸附能力，染色性能好、抗溶劑能力強和信噪比高，有助于提高檢測靈敏度，而且開放的孔結(jié)構(gòu)容易接近被吸附的蛋白質(zhì)，并有助于去除背景上沒有吸附的探針，可以說是免疫印跡檢測理想的印跡膜。Immobilon-PSQ轉(zhuǎn)印膜是印跡小分子蛋白質(zhì)（<20KDa）的理想選擇——優(yōu)良的蛋白質(zhì)吸附性能，滲漏少。內(nèi)表面面積較大，可供蛋白質(zhì)吸附從而提高蛋白質(zhì)測序的得率。由于不含污染性支撐物或表面活性劑，Immobilon-PSQ層析譜上的背景峰值極小。Immobilon-FL也是Millipore值得驕傲的產(chǎn)品，因為這是*個專門為熒光顯色優(yōu)化的轉(zhuǎn)移膜。通過實驗證明，這種膜在Kodak成像系統(tǒng)可以顯示僅7ng的蛋白，聽起來不錯吧，有興趣可以試一試。這幾種膜除了一般的PVDF膜的優(yōu)點之外，zui大特點就是一個字——快。按照Millipore的操作手冊，Immobilon可以在保證質(zhì)量的前提下縮短WB時間到2個小時——主要是縮短封閉和洗脫時間。這可真是個好消息，因為坐在那兒等WB結(jié)果多浪費時間啊！縮短這個費時而枯燥的過程，早出結(jié)果，可以提高實驗效率，利于我們分析實驗結(jié)果，考慮下步對策嘛。卷膜經(jīng)濟實惠，裁剪剩下的邊角料還可以用來做點雜交，而預(yù)裁剪的即用膜更適合高通量等等“用金錢換時間”的實驗。再次強調(diào)的是，疏水PVDF膜在用前必須經(jīng)過50%或以上體積比的甲醇或者乙醇溶液處理幾分鐘，待膜變成半透明后用MilliQ水或者純水漂洗一下，轉(zhuǎn)入電泳緩沖液平衡才能用。
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